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乳酸脫氫酶活性(WST-8法) 微量法

簡(jiǎn)要描述:

?乳酸脫氫酶(LDH)活性微量法測(cè)定的原理?是通過(guò)檢測(cè)LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過(guò)程中NADH的生成量來(lái)間接測(cè)定LDH的活性。

更新時(shí)間:2025-07-04

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乳酸脫氫酶活性(WST-8法) 微量法

?乳酸脫氫酶(LDH)活性微量法測(cè)定的原理?是通過(guò)檢測(cè)LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過(guò)程中NADH的生成量來(lái)間接測(cè)定LDH的活性。

具體過(guò)程如下:

?反應(yīng)原理?:LDH的作用下,NAD+被還原生成NADH。NADHWST-8相互作用產(chǎn)生顏色,從而進(jìn)行比色測(cè)定(λmax=450 nm)?。

?反應(yīng)條件?:LDHNAD還原為NADH,NADHWST-8相互作用產(chǎn)生顏色。這個(gè)反應(yīng)在冰上避光進(jìn)行,各組分(如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer)需在實(shí)驗(yàn)前從冰箱中取出并平衡至室溫,整個(gè)過(guò)程需避光操作?。

?吸光度測(cè)量?:450 nm波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度,吸光度與LDH活性成正比,可以通過(guò)比色法測(cè)定LDH的活性?。

?實(shí)驗(yàn)步驟和所需設(shè)備?:

?實(shí)驗(yàn)步驟?:準(zhǔn)備工作液(1×Assay BufferNAD、WST-8、EnhancerLactate混合均勻),將工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中,加入待測(cè)樣品,37℃恒溫孵育一定時(shí)間后測(cè)量吸光度?。

?所需設(shè)備?:酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測(cè)450 nm處的吸光度)、恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)、96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭、去離子水、勻漿器(如果是組織樣本)?。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)?:

?試劑保存?:各組分(如Assay BufferLactate、NAD、WST-8、Enhancer)需在冰上避光保存,避免反復(fù)凍融?。

?操作注意事項(xiàng)?:整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需在冰上避光進(jìn)行,避免光照影響結(jié)果?。


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