嫩草伊人久久精品少妇av网站,和男神们啪啪日常np高h漫画,控精止泄教程锻炼法,亚洲色成人网站www永久四虎

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > 解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無擴(kuò)增產(chǎn)物
解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無擴(kuò)增產(chǎn)物
點擊次數(shù):1655 更新時間:2022-05-23

解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無擴(kuò)增產(chǎn)物(即陽性對照中有條帶,而樣品則無條帶)方法:

  1、條帶放置時間過久,核酸被降解,最好在48h內(nèi)進(jìn)行電泳檢測。

  2、DNA模板純度低,如含有雜蛋白質(zhì)或Taq酶抑制劑,可對DNA進(jìn)行再次純化或重新用優(yōu)質(zhì)試劑盒提取DNA; DNA濃度太低時,可以加大模板量;對具有二級結(jié)構(gòu)DNA使用較好的聚合酶;提取DNA時,避免吸入酚類試劑。

  3、對設(shè)計不合理的引物進(jìn)行重新設(shè)計合成;引物應(yīng)高濃度小量分裝保存,防止多次凍融而降解失效;檢測引物OD值并進(jìn)行電泳檢測以確保兩條引物濃度一致。

  4、酶失活時,更換新酶,或新舊兩種酶同時使用,以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導(dǎo)致假陰性。

  5、PCR反應(yīng)條件:提高變性/退火溫度;適當(dāng)增加循環(huán)次數(shù)。

  6、Mg2+濃度過低可影響PCR擴(kuò)增產(chǎn)量甚至使PCR擴(kuò)增失敗,而Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,因而可適當(dāng)提高M(jìn)g2+濃度。

  7、如果靶序列發(fā)生突變或缺失時,也會影響引物和模板的特異性結(jié)合,產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

  Q3:非特異性條帶擴(kuò)增或者條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象

  Answer:

  1、當(dāng)引物特異性差或引物形成二聚體時,可重新設(shè)計引物或者使用巣式PCR

  2、若模板或引物濃度過高,可適當(dāng)降低模板或引物濃度

  3、酶量過多,則適當(dāng)減少酶量

  4、Mg2+濃度偏高,則降低鎂離子濃度

  5、退火溫度偏低,適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法(94變性,65左右退火與延伸)

  6、循環(huán)次數(shù)過多,不僅會降低擴(kuò)增效率,且會使錯誤摻入率增加,因此需要減少循環(huán)次數(shù)。


特黄特色大片免费播放器图片| 又色又爽又黄的视频软件app | 女性生殖私密精油按摩| 美女露100%双奶头无遮挡| 9孩岁女精品╳片| 色狠狠一区二区三区香蕉| 亚洲av无码乱码在线观看 | 老师脱了内裤让我进去| 嫂子的职业在线观看| 久久精品午夜一区二区福利| 野花日本hd免费高清版7| 无码毛片aaa在线| 对付老公出轨最狠的一招| 中文文字乱码一二三四| z0ozo0人善之交另类| 一本大道熟女人妻中文字幕在线| 被迫穿丁字内裤带着震蛋出门小说| 岳帮我囗交吞精| 免费高清理伦片a片在线观看| 无码亚洲一本aa午夜在线观看| 大胆人体艺术| 国产又粗又猛又爽又黄的a片小说| av电影网站| 人妻女教师耻辱の教室| 清纯校花被c得欲仙欲死| 躺着把jiji向上摁平然后揉搓| 亚洲精品中字中出无码| 把黄瓜慢慢推进去…啊| 欧美极品jizzhd欧美| 樱桃视频大全免费高清版| 性一交一无一伦一精一品| 老师好大好爽我要喷水了视频| 妇与子乱肉肉视频| 啦啦啦中文免费视频高清观看| 几个东北熟妇的性经历| 麻豆妓女爽爽一区二区三| 亚洲av欧洲av人人爽爽软件| 每天被大佬高hplay肉np| 女人被躁到高潮嗷嗷叫文| 国产999精品久久久久久| 玩弄丰满熟妇xxxxx性|